10 Cac PP bien nap ADN tai to hop vao tb
Sau khi tạo ADN tái tổ hợp,bước tiếp theo là biến nạp chúng vào tb chưa mang plasmid.Biến nạp đc thực hiện theo nhìu cách khác nhau
a) Hóa biến nạp
ADN tái tổ hợp đc ủ với số lượng lớn TBVK chưa có plasmid,có khả năng dung nạp.Xử lý = CaCl2,lạnh kèm sốc nhiệt(42 độ trong 2 fut') thì hiệu quả tạo các thể biến nạp rất cao.Những cải tiến tiếp theo đã tăng hiệu quả biến nạp lên gấp 100-1000 lần.PP này đối với TBĐV thường dùng Ca3(PO4)2.
Ưu điểm: đơn giản,dễ làm,ít tốn kém,plasmid dễ bị phá hủy
Nhược điểm: tỉ lệ biến nạp thấp
b) Điện biến nạp
PP này đc use để đưa các phân tử phân cực vào trong tb chủ qua màng tb.Trong pp này 1 xung điện cao thế trong khoảnh khắc có khả năng làm rối loạn cấu trúc màng kép phospholipid,tạo ra các lỗ thủng tạm thời cho phép các phân tử ADN ngoại trú từ môi trường xâm nhập vào bên trong tb.
Để tạo ra xung điện cao thế trong 1 thòi gian ngắn ng ta sử dụng 1 thiết bị gọi là máy xung gen or máy biến nạp
PP này có thể sử dụng đối với gần như tất cả các loại tb của các loài.
Ưu điểm: hiệu quả biến nạp cao.Đoạn ADN ngoại lai đc biến nạp có kích thước lớn
Nhược điểm: nếu các xung điện có cường độ và chiều dài k đúng thì 1 số lỗ of tb sẽ trở nên quá lớn or bị hỏng k thể đóng lại sau khi tb phóng điện,làm cho tb bị tổn thương.Sự vận chuyển ADN ngoại lai vào và ra khỏi tb trong suốt thoi gian điện biến nạp là tương đối k đặc hiệu,điều này dẫn đến k cân = ion mà sau đó sẽ làm rối loạn chức năng of tb và tb chết.
c)Vi tiêm
Ng tắc of vi tiêm là bắn 1 lượng nhỏ ADN đc tiêm trực tiếp vào nhân tb phôi trần or tb nguyên vẹn 1 cách cơ học dưới kính hiển vi.Hiện nay pp vi tiêm dung dịch ADN vào hợp tử là pp có hiệu quả nhất trên ĐV có vú và hiện là pp chủ yếu đc use để chuyển gen vào vật nuôi tạo các đv chuyển gen
Ưu điểm: cho phép đưa gen vào đúng vị trí mong muốn ở từng tb với hiệu quả tương đối cao
Nhược điểm: đòi hỏi phải tinh vi,tỉ mỉ,cực kì chính xác nên hạn chế số lượng tb vi tiêm va ngoài ra còn có thể làm tổn thương đến tb phôi do tác nhân cơ học gây ra khi tiến hành vi tiêm.
d) Bắn ADN vào TB
Ở TBTV có vách rất dày,đc cấu tạo = cellulose,vì vậy rất khó để biến nạp,Để khắc phục khó khăn này ng ta dùng pp bắn ADN vào tb,pp này dùng 1 thiết bị gọi là súng bắn gen ADN và đc bắn với tốc độ nhanh xuyên thủng vách để đưa ADN or ARN vào trong TB.
Ưu điểm: thao tác dẽ dàng,có thể chuyển gen vào nhiều loại tb vào mô,các tb đc biến nạp có tỉ lệ sống sót cao,cho phép đưa các gen vào tb ở vị trí mong muốn.
Nhược điểm: tb bị vỡ nhiều.
Bạn đang đọc truyện trên: Truyen4U.Com